将获得的序列应用BLAST(Basic Local Alignment Search Tool)方法进行结果判定,BLAST法是通过两两序列局部比对来查询数据库中与之最匹配的序列。BLAST结果中相似性最高的序列对应的物种为查询序列对应的物种。可以在中药材DNA条形码鉴定系统或GenBank数据库中进行BLAST鉴定。
1)以中药材DNA条形码鉴定系统网站BLAST鉴定为例,操作流程如下:
(1)打开中药材DNA条形码鉴定系统网址(http://www. tcmbarcode.cn),进入中药材DNA条形码鉴定系统主页。
(2)点击“物种鉴定”进入如下页面。
(3)根据需鉴定物种的种类,选择对应的鉴定数据库,如点击植物类药材鉴定(ITS/ITS2)。
(4)复制需要鉴定的物种序列,在“植物类药材鉴定(ITS/ITS2)”的序列输入栏粘贴需要鉴定的序列,点击左下角的提交按钮,进行BLAST鉴定。
(5)在BLAST比对结果中,首先看到查询序列,也就是对输入的查询序列进行比对,确保输入序列无误。“物种鉴定结果”栏显示与查询序列最接近的物种为人参Panax ginseng,在“序列比对信息”栏可以查看相关比对信息,如序列相似性,分值和E值。
2)以GenBank数据库BLAST鉴定为例,操作流程如下:
(2). 在Enter Query Sequence中粘贴入需要校对的序列(Query)(建议用fasta格式)。
(3). 在Choose Search Set中选others(nr etc.)数据库。
(4). 点击左下角BLAST
(5). 在BLAST结果中,Descriptions项下查看序列相似性(Max ident)最高的物种,即为查询序列对应的物种。如下图所示,BLAST鉴定结果为人参Panax ginseng C. A. Mey.。